همسانه سازی و بیان ایمونوتوکسین اونتاک به صورت هیبریدی با دنباله اینتئینی
نویسندگان
چکیده
مقدمه: اینتئین ها بخش های درونی در برخی پروتئین های مخمری و یوکاریوت های تک سلولی هستند که می توانند در فرآیند پیرایش پروتئین ها از مابقی پروتئین جدا شوند. بعد از شناسایی مکانیسم عملکرد اینتئین ها، کاربرد این توالی ها در تخلیص تک مرحله ای پروتئین های نوترکیب مورد توجه قرار گرفته و دنباله های خود برشگر اینتئینی مختلفی گسترش یافتند. مزیت روش کاربرد دنباله های اینتئینی برای تخلیص پروتئین ها نسبت به بقیه روش های تخلیص پروتئین، عدم احتیاج به آنزیم های پروتئازی و مراحل حذف پروتئاز می باشد که این روش را از لحاظ اقتصادی حائز اهمیت می کند. در این مطالعه، ژن به رمز درآورنده denileukin diftitox (با نام تجاری اونتاک،ontak) بصورت مولکولی با دنباله اینتئینی تلفیق گردید و میزان بیان آن در پلاسمید ptxb1 مورد بررسی قرار گرفت. روش بررسی: در این مطالعه، بر اساس جایگاه های چندتایی همسانه سازی(mcs) وکتور ptxb1، پرایمرهای مناسب طراحی شدند و پس از تکثیر قطعه کدکننده اونتاک، همسانه سازی با استفاده از آنزیم های ndei و sapi انجام گرفت. این سازه نوترکیب(ptx-idz) به سلول های e.coli سویه er2566 ترانسفورم گردید و بیان اونتاک مورد مطالعه قرار گرفت. نتایج: همسانه سازی توالی اونتاک در تلفیق با دنباله اینتئینی در وکتور بیانی ptxb1 توسط pcr و برش آنزیمی تائید شد. بیان پروتئین نوترکیب با روش sds-page آنالیزو با روش لکه گذاری وسترن تائید گردید. نتیجه گیری: جایگاه آنزیم محدودکننده sapi در محل تلفیق توالی اونتاک با دنباله اینتئینی عدم ورود هیچ اسید آمینه اضافه ای را در پروتئین هدف، تضمین می نماید. همچنین بیان ایمونوتوکسین اونتاک در این سازه نسبت به بیان این پروتئین به صورت تلفیق شده با دنباله هیستیدینی ارزیابی گردید. با توجه به بیان مناسب پروتیئن اونتاک، در مراحل بعدی، تخلیص تک مرحله ای پروتئین دارویی اونتاک انجام خواهد گرفت.
منابع مشابه
همسانهسازی و بیان ایمونوتوکسین اونتاک به صورت هیبریدی با دنباله اینتئینی
Introduction: Inteins (INT) are internal parts of a number of proteins in yeast and some other unicellular eukaryotes, which can be separated from the immature protein during protein splicing process. After identifying the mechanism of intein action, applications of these sequences are be considered in the single- step purification of recombinant proteins and different intein tags were develope...
متن کاملمقایسه تأثیر وضعیت طاق باز و دمر بر وضعیت تنفسی نوزادان نارس مبتلا به سندرم دیسترس تنفسی حاد تحت درمان با پروتکل Insure
کچ ی هد پ ی ش مز ی هن ه و فد : ساسا د مردنس رد نامرد ي سفنت سرتس ي ظنت نادازون داح ي سکا لدابت م ي و نژ د ي سکا ي د هدوب نبرک تسا طسوت هک کبس اـه ي ناـمرد ي فلتخم ي هلمجزا لکتورپ INSURE ماجنا م ي دوش ا اذل . ي هعلاطم ن فدهاب اقم ي هس عضو ي ت اه ي ندب ي عضو رب رمد و زاب قاط ي سفنت ت ي هـب لاتـبم سراـن نادازون ردنس د م ي سفنت سرتس ي لکتورپ اب نامرد تحت داح INSURE ماجنا درگ ...
متن کاملبهینه سازی ترکیب شیمیایی محیط کشت سلولی معین برای تولید ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک
زمینه و اهداف: ایمونوتوکسین یک پروتئین سمی است که به عنوان یک ترکیب نوین برای درمان سرطان پیشنهاد شده است. اونتاک یک ایمونوتوکسین نوترکیب می باشد که از توکسین دیفتری هیبرید شده با اینترلوکین2 تشکیل شده است. در این مطالعه بهینه سازی ترکیب محیط کشت معین بمنظور بیان اونتاک بررسی شده است. مواد و روش کار: در این تحقیق از باکتری سویه BL21(DE3) ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب PET-IDZ جهت بیان اونتاک...
متن کاملهمسانه سازی و بیان ایمونوتوکسین نوترکیب با استفاده از توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت
زمینه و هدف: ایمونوتوکسین یک توکسین هدف مند است که از اتصال دو بخش مجزا (بخش ایمنی و بخش توکسینی) با واسط شیمیایی یا پپتیدی اختصاصی تشکیل می شود. هدف اصلی تحقیق حاضر تولید پروتئین هیبریدی و نوترکیب مشتمل بر توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیتی است. مواد و روش ها: با توجه به ساختار اولین ایمنوتوکسین تجاری نوترکیب (اونتاک، پروتئین هیبریدی شامل توکسین دیفتری و اینترلوکین 2)، ژن به رمزد...
متن کاملهمسانه سازی پیشبر 2A11 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن
بیان موقت ژنهای بیگانه در بافتهای گیاهی برای آنالیز عملکرد ژن در زمان کوتاه روش کارآمدی میباشد. این روش سریع، انعطاف‌پذیر، ساده و در بافتهای تمایز یافته قابل اجرا است. پیشبر 2A11 از پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجهفرنگی است که باعث بیان بالای ژن 2A11 در میوه میشود. هدف از این تحقیق همسانهسازی پیشبر 2A11 و بررسی بیان آن است. پس از استخراج DNA ژنومی از گیاه گوجهفرنگی، پیشبر 2A11 با استفا...
متن کاملهمسانه سازی و بررسی بیان موقت پیشبر pat1 گیاه سیب زمینی با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن
To achieve the high level of gene expression, promoters are key elements. Patatin promoter has been used as a specific gene expression in potato tubers. Patatin is a group of glycol protein in potato tuber which is code by a multiple family genes. This protein makes up more than 40% of soluble proteins of potato tubers. Class I Promoters mainly responsible for tuber -specific expression patte...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزدجلد ۲۴، شماره ۳، صفحات ۲۳۲-۲۴۰
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023